ELISA-sarjojen testausvaatimukset

Tee hyvä kontrasti muodollisessa testissä, positiivisen ja negatiivisen kontrollin testiolosuhteet tulee ottaa ja testattavat näytteet on otettava kahtena kappaleena testitulosten tarkkuuden varmistamiseksi.

Joskus tausta on korkeampi, mikä viittaa epäspesifiseen reaktioon, voidaan sulkea lampaan seerumilla, kanin seerumilla tai BSA:lla.

Koeolosuhteiden valinta

ELISA:ssa on tärkeää valita erilaisia ​​koeolosuhteita, mukaan lukien: (1) Kiinteän faasin kantaja-aineiden valinta: Monia aineita voidaan käyttää kiinteän faasin kantajina, kuten PVC, polystyreeni, polyakryyliamidi ja selluloosa. Se voi olla koveran levyn, koeputken, helmen jne. muodossa. Tällä hetkellä sitä käytetään yleisesti 40-kuoppaisissa polystyreenikoverissa levyissä.

Riippumatta siitä, millaista kantajaa, ennen käyttöä voidaan seuloa: samalla määrällä antigeenipakkaus on samoissa koeolosuhteissa reagoida, onko sen värintoistoreaktio on homogeeninen, jonka mukaan se on hyvä adsorptiokyky. (2) Pakkaus vasta-aineen (tai antigeenin) valinnan mukaan: vasta-aine (tai antigeeni) adsorboituneena kiinteän -faasin kantajan pinnalle, vaatimuksen vakavuus on parempi, adsorptio vaatii yleensä pH-arvon 9,0-9,6. Adsorptiolämpötilalla, -ajalla ja proteiinimäärällä on myös tietty vaikutus, yleensä yli 4 astetta C 18-24 tuntia. Proteiinipakkausten optimaalinen konsentraatio on titrattava: kun ne on pakattu eri proteiinipitoisuuksilla (0,1, 1,0 ja 10 µg/ml jne.), positiivisten näytteiden OD-arvot havaitaan, kun muut testiolosuhteet ovat samat. Valitse pitoisuus, jolla on suurin OD-arvo ja pienin proteiinimäärä.

Useimmille proteiineille se on yleensä 1 - 10 ug/ml. (3) Entsyymi-leimatun vasta-aineen toimintakonsentraation valinta: ensinnäkin suoraa ELISA-menetelmää käyttävän titrauksen alkuvaikutus (katso entsyymi-leimattu vasta-aineosa).

Korjaa sitten muut olosuhteet tai käytä "square array -menetelmää" (pack edgy, referenssi tutkittavalle näytteelle ja entsyymi{0}}leimatut vasta-aineet ovat erilaisia ​​laimennoksia) muodollisessa koejärjestelmässä titraa tarkasti sen työpitoisuuden. (4) Entsyymin emäksen ja vedyn luovuttajan valinta: vedyn luovuttajan valinta on edullinen, turvallinen, kirkkaan värin-toistoreaktio ja itsessään on väritön. Joillakin vedyn luovuttajilla (esim. OPD jne.) voi olla syöpää aiheuttavia vaikutuksia, joten niiden suojaamisesta on huolehdittava. Ehdollisten ihmisten tulisi käyttää ei--karsinogeenisia, erittäin herkkiä vedyn luovuttajia, kuten TMB ja ABTS on tällä hetkellä tyydyttävämpi vedyn luovuttaja. Vaikutusajan jälkeen tulee lisätä vahvoja happoja tai emäksiä reaktion pysäyttämiseksi. Yleensä alustan vaikutusaika, 10-30 minuuttia, on sopiva. Alustan käyttöneste on valmistettava vasta, varsinkin jos H2O2 lisätään ennen käyttöä.